Analaisi mRNA PSA: qualitativa e quantitativa

Le cellule neoplastiche esprimono spesso geni che nelle corrispondenti cellule normali sono silenti. Questi geni possono codificare proteine che forniscono alla cellula vantaggi selettivi per la crescita o altre caratteristiche quali l’invasivitĂ  e la capacitĂ  metastatica. La possibilitĂ  di poter rilevare l’espressione di tali geni è fondamentale nella diagnosi, prevenzione e terapia dei tumori. Tecniche molecolari altamente sensibili, quali la Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), consentono di studiare l’espressione di marcatori tumorali a partire da minime quantitĂ  di cellule neoplastiche. Questo approccio aumenta nettamente la possibilitĂ  di diagnosi di micrometastasi rispetto all’esame istologico classico, anche se coadiuvato dallo studio immunoistochimico. L’ utilizzo della PCR permette, infatti, di evidenziare la presenza di una cellula maligna in un milione di cellule normali. Lo studio dell’espressione di marcatori tumorali utilizzando la RT-PCR è sempre piĂą diffuso. I geni che possono essere utilizzati come markers per individuare la presenza delle cellule neoplastiche devono possedere due caratteristiche: a) una elevata specificitĂ  e b) non devono essere espressi nel tessuto linfatico normale. Per quanto riguarda il tumore alla prostata, il gene che possiede queste caratteristiche è l’Antigene Prostatico Specifico (PSA). La metodica comunemente utilizzata prevede l’amplificazione mediante RT-PCR di frammenti genici con utilizzo di primers fluorescenti (PF) e l’elettroforesi capillare (CE) su sequenziatore automatico ABI PRISM 310. L’ elettroforesi su capillare permette di analizzare volumi molto piccoli di reazione con una risoluzione e una sensibilitĂ  di circa 20 volte superiore a quella dei metodi elettroforetici classici. L’analisi consiste nell’individuazione, mediante amplificazione genica (PCR), dell’mRNA del PSA di eventuali micrometastasi (cellule tumorali, i piccoli “cluster” di tali cellule) presenti nel circolo sanguigno. Il parametro è molto importante nella diagnosi precoce dei tumori alla prostata, nella scelta della terapia e nel follow up del paziente dopo prostatectomia. L’analisi quantitativa permette la valutazione numerica delle cellule prostatiche rilevate nel campione in esame.

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